INTERACTION OF ACYCLIC NUCLEOSIDE PHOSPHONATES WITH THE TWO 6-OXOPURINE PHOSPHORIBOSYLTRANSFERASE PURINE SALVAGE ENZYMES FROM E. coli

Harmen Jans
Geneeskunde
Persbericht

INTERACTION OF ACYCLIC NUCLEOSIDE PHOSPHONATES WITH THE TWO 6-OXOPURINE PHOSPHORIBOSYLTRANSFERASE PURINE SALVAGE ENZYMES FROM E. coli

Nieuwe wapens in de strijd tegen bacterie

Besmette sojascheuten waren eind mei de oorzaak van een uitbraak van de EHEC-bacterie in Noord-Duitsland. Naast miljoenen euro’s schade voor de tuinbouwsector in bijna heel Europa was er ook veel menselijk leed. De bacterie was resistent tegen veel gebruikelijke antibiotica en eiste uiteindelijk 52 doden. Antibiotica resistente bacteriën veroveren de laatste tijd steevast meer terrein. Indien deze trend zich verderzet, kunnen we af te rekenen krijgen met voorheen behandelbare ziektes die onbehandelbaar zijn geworden, zoals in de dagen vóór de ontdekking van antibiotica. Het probleem van antibiotica resistentie is vandaag de dag een van de grootste uitdagingen van de farmaceutische industrie. In mijn onderzoek worden voor het eerst de antibacteriële eigenschappen van een groep antivirale stoffen getest. We hopen daarmee de eerste stappen te zetten naar de ontdekking van een nieuwe groep antibiotica en nieuwe wapens te leveren in de strijd tegen bacteriën.

De bacteriële wereld is nooit opgezet geweest met onze pogingen om haar uit te roeien. De komst van antibiotica werd beantwoord met meedogenloze selectie van resistente bacteriën en uitwisseling van resistentiegenen binnen en tussen verschillende soorten bacteriën. De farmaceutische industrie bleef echter de bovenhand houden dankzij de ontwikkeling van nieuwe moleculen. Tussen 1940 en 1962 werden meer dan 20 klassen antibiotica op de markt gebracht. Maar sinds de jaren ‘70 hebben slechts twee nieuwe klassen de weg naar de markt gevonden en de laatste twee decennia zijn we steeds meer achterop aan het geraken. De nood aan nieuwe antibiotica die op een andere manier werken dan de vorige is hoger dan ooit. 

Internationaal onderzoek

Een antwoord vinden op die vraag was het doel van mijn onderzoek aan The University of Queensland in Brisbane, waar ik deel uitmaakte van een onderzoeksteam van de Katholieke Universiteit Leuven (België), The University of Queensland (Australië) en de Academy of Sciences of the Czech Republic (Tsjechië). Het hoofddoel van dit team van wetenschappers is onderzoek naar een nieuw geneesmiddel tegen malaria, want ook in de strijd tegen malariaparasieten hebben we te kampen met resistentie. Een aantal moleculen die het team bestudeert heb ik geanalyseerd op hun werking tegen bacteriën. De onderzochte moleculen behoren tot een klasse geneesmiddelen die oorspronkelijk op de markt kwam in de jaren ’80 om infecties te bestrijden die veroorzaakt worden door virussen (zoals het hepatitis B en HIV virus). Ze worden ‘acyclische nucleoside fosfonaten’ genoemd (afgekort ANP). Deze stoffen blokkeren een aantal enzymen die bij virussen nodig zijn voor de synthese en replicatie van DNA, hetgeen noodzakelijk is om te overleven. Tot op heden is er nog geen onderzoek gedaan of ook enzymen van bacteriën worden geblokkeerd door de ANPs. Indien dit inderdaad zo blijkt te zijn, hebben we te maken met moleculen die op een geheel nieuwe manier bacteriën te lijf gaan. 

Veelbelovende resultaten

In het eerste deel van mijn onderzoek werd het blokkerend effect van de ANPs bestudeerd door deze stoffen in een proefbuis te mengen met een reeks enzymen die bacteriën gebruiken om de bouwstenen van DNA aan te maken. Vervolgens werd gemeten of en in welke mate deze bacteriële enzymen werden geblokkeerd door de ANPs. Er werd gekozen om de enzymen te onderzoeken van de bacterie Escherichia coli. Deze bacterie komt zeer veel voor in het menselijk lichaam, is reeds goed gekend uit vorig onderzoek en de enzymen ervan zijn gemakkelijk aan te maken in het laboratorium.E. coli is ook frequent de oorzaak van infecties bij mensen en dedodelijke EHEC-bacterie uit Duitsland is bovendien een bepaalde E. coli stam. Het resultaat van dit onderzoek toonde tot onze verbazing dat een van de ANPs de bacteriële enzymen uitermate sterk blokkeerde. In de volgende fase probeerden we aan de hand van een aantal scantechnieken een driedimensionale afbeelding te maken van één van de E. coli enzymen, terwijl dit geblokkeerd wordt door een ANP. Het is nog even wachten op resultaten omtrent deze 3D ‘foto’s’, maar de eerste resultaten zijn veelbelovend! Vervolgens werd de interactie tussen het E. coli enzym en de sterkste ANP bestudeerd door middel van een andere scantechniek, namelijk NMR spectroscopie. Deze techniek liet ons toe na te gaan of er bepaalde delen van het enzym bewegingen ondergaan wanneer het geblokkeerd wordt door de ANP. De eerste resultaten van deze tests tonen sterke veranderingen van het enzym, waarbij het enzym als het ware in een minder voordelige positie wordt gedwongen door de ANP. Dit kan mogelijk een verklaring zijn voor de sterke blokkering van het enzym door de ANP. 

Gouden toekomst

De conclusie van mijn onderzoek is dat bacteriële enzymen in sterke mate door de ANPs worden geblokkeerd. Hiermee wordt voor het eerst beschreven dat deze klasse (oorspronkelijk antivirale) geneesmiddelen ook antibacteriële eigenschappen bezit. In vivo studies met levende bacteriën zullen nog moeten volgen om deze resultaten te bevestigen. Uit ander onderzoek van het team waarmee ik gewerkt heb, volgt ook dat de ANPs werkzaam zijn tegen malariaparasieten. Een gouden toekomst lijkt weggelegd voor deze klasse van geneesmiddelen! Antibiotica resistentie staat terecht in het centrum van de aandacht. Indien we willen blijven genieten van de moderne geneeskunde in haar huidige vorm zullen nieuwe klassen antibiotica de weg naar de markt moeten vinden. Dat is niet makkelijk in een economisch klimaat waar onderzoek en ontwikkeling van nieuwe antibiotica niet meer de voorkeur genieten van de farmaceutische industrie wegens een zware wetgeving en beperkte winst. Toch mogen we de toekomst niet te zwart inzien en mogen we de voordelen van antibiotica niet minimaliseren. “In many ways, this is it. This is potentially the end.”, verklaarde Tim Walsh, ontdekker van het resistentiegen NDM-1 van een multiresistente bacterie in New Delhi. Dit is misschien het einde van een huidige groep antibiotica, maar de zoektocht naar nieuwe antibiotica is een ‘neverending story’.

 

Bibliografie
  • Balendiran, G.K.; Molina, J.A.; Xu, Y.; Torres-Martinez, J.; Stevens, R.; Focia, P.J.; Eakin, A.E.; Sacchettini, J.C.; Craig, S.P. 3rd (1999). Ternary complex structure of human HGPRTase, PRPP, Mg2+, and the inhibitor HPP reveals the involvement of the flexible loop in substrate binding. Protein Sci, 8, 1023-31.
  • Barcia, J.J. (2007). The Giemsa stain: its history and applications. Int J Surg Pathol, 15, 292-296.
  • Bei, A.K.; Desimone, T.M.; Badiane, A.S.; Ahouidi, A.D.; Dieye, T.; Ndiaye, D.; Sarr, O.; Ndir, O.; Mboup, S.; Duraisingh, M.T. (2010). A flow cytometry-based assay for measuring invasion of red blood cells by Plasmodium falciparum. Am J Hematol, 85, 234-7.
  • Benson, C.E.; Love, S.H.; Remy, C.N. (1970). Inhibition of de novo purine biosynthesis and interconversion by 6-methylpurine in Escherichia coli. J Bacteriol, 101, 872-80.
  • Biazus, G.; Schneider, C.Z.; Palma, M.S.; Basso, L.A.; Santos, D.S. (2009). Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase from Mycobacterium tuberculosis H37Rv: cloning, expression, and biochemical characterization. Protein Expr Purif, 66, 185-90.
  • Breman, J.G. (2009). Eradicating malaria. Sci Prog, 92, 1-38.
  • Carlton, J. (2003). The Plasmodium vivax genome sequencing project.Trends Parasitol, 19, 227-31.
  • Chalker, A.F.; Minehart, H.W.; Hughes, N.J.; Koretke, K.K.; Lonetto, M.A.; Brinkman, K.K.; Warren, P.V.; Lupas, A.; Stanhope, M.J.; Brown, J.R.; Hoffman, P.S. (2001). Systematic identification of selective essential genes in Helicobacter pylori by genome prioritization and allelic replacement mutagenesis. J Bacteriol, 183, 1259-68.
  • Cooke, E.M. (1985). Escherichia coli--an overview. J Hyg (Lond), 9, 523-30.
  • Craig, S.P. 3rd; Eakin, A.E. (2000). Purine phosphoribosyltransferases. J Biol Chem, 275, 20231-4.
  • Davis, B.H. (2001). Diagnostic utility of red cell flow cytometric analysis. Clin Lab Med, 21, 829-40.
  • De Clercq, E.; Holý, A. (2005). Acyclic nucleoside phosphonates: a key class of antiviral drugs. Nat Rev Drug Discov, 4, 928-40.
  • De Clercq, E.; Holý, A.; Rosenberg, I.; Sakuma, T.; Balzarini, J.; Maudgal, P.C. (1986). A novel selective broad-spectrum anti-DNA virus agent. Nature, 323, 464-7.
  • De Clercq, E.; Sakuma, T.; Baba, M.; Pauwels, R.; Balzarini, J.; Rosenberg, I.; Holý, A. (1987). Antiviral activity of phosphonylmethoxyalkyl derivatives of purine and pyrimidines. Antiviral Res, 8, 261-72.
  • De Gregorio, L.; Nyhan, W.L.; Serafin, E.; Chamoles, N.A. (2000). An unexpected affected female patient in a classical Lesch-Nyhan family. Mol Genet Metab, 69, 263-8.
  • Deo, S.S.; Tseng, W.C.; Saini, R.; Coles, R.S.; Athwal, R.S. (1985). Purification and characterization of Escherichia coli xanthine-guanine phosphoribosyltransferase produced by plasmid pSV2gpt. Biochim Biophys Acta, 839, 233-9.
  • Deutsch, S.I.; Long, K.D.; Rosse, R.B.; Mastropaolo, J.; Eller, J. (2005). Hypothesized deficiency of guanine-based purines may contribute to abnormalities of neurodevelopment, neuromodulation, and neurotransmission in Lesch-Nyhan syndrome. Clin Neuropharmacol, 28, 28-37.
  • Domin, B.A.; Mahony, W.B.; Zimmerman, T.P. (1991). Desciclovir permeation of the human erythrocyte membrane by nonfacilitated diffusion. Biochem Pharmacol, 42, 147-52.
  • Downie, M.J.; Saliba, K.J.; Howitt, S.M.; Bröer, S.; Kirk, K. (2006). Transport of nucleosides across the Plasmodium falciparum parasite plasma membrane has characteristics of PfENT1. Mol Microbiol, 60, 738-48.
  • Duckworth, M.; Ménard, A.; Megraud, F.; Mendz, G.L. (2006). Bioinformatic analysis of Helicobacter pylori XGPRTase: a potential therapeutic target. Helicobacter, 11, 287-95.
  • Eads, J.C.; Scapin, G.; Xu, Y.; Grubmeyer, C.; Sacchettini, J.C. (1994). The crystal structure of human hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase with bound GMP. Cell, 78, 325-34.
  • Elgemeie, G.H. (2003). Thioguanine, mercaptopurine: their analogs and nucleosides as antimetabolites. Curr Pharm Des, 9, 2627-42.
  • Free, M.L.; Gordon, R.B.; Keough, D.T.; Beacham, I.R.; Emmerson, B.T.; de Jersey, J. (1990). Expression of active human hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase in Escherichia coli and characterisation of the recombinant enzyme. Biochim Biophys Acta, 1087,205-11.
  • Gardner, M.J.; Hall, N.; Fung, E.; White, O.; Berriman, M.; Hyman, R.W.; Carlton, J.M.; Pain, A.; Nelson, K.E.; Bowman, S.; Paulsen, I.T.; James, K.; Eisen, J.A.; Rutherford, K.; Salzberg, S.L.; Craig, A.; Kyes, S.; Chan, M.S.; Nene, V.; Shallom, S.J.; Suh, B.; Peterson, J.; Angiuoli, S.; Pertea, M.; Allen, J.; Selengut, J.; Haft, D.; Mather, M.W.; Vaidya, A.B.; Martin, D.M.; Fairlamb, A.H.; Fraunholz, M.J.; Roos, D.S.; Ralph, S.A.; McFadden, G.I.; Cummings, L.M.; Subramanian, G.M.; Mungall, C.; Venter, J.C.; Carucci, D.J.; Hoffman, S.L.; Newbold, C.; Davis, R.W.; Fraser, C.M.; Barrell, B. (2002). Genome sequence of the human malaria parasite Plasmodium falciparum. Nature, 419, 498-511.
  • Giacomello, A.; Salerno, C. (1978). Human hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase. Steady state kinetics of the forward and reverse reactions. J Biol Chem, 253, 6038-44.
  • Giemsa, G. (1904). Eine vereinfachung und vervollkommnung meiner methylenazur-methlyenblau-eosin-farbemethode zur erzielung der Romanowsky-Nocht’schen chromatinfarbung. Zentabl. Bakteriol. Parasitenkd. Infectkrankh.37:308.
  • Gots, J.S.; Benson, C.E. (1973). Genetic control of bacterial purine phosphoribosyltransferases and an approach to gene enrichment. Adv Exp Med Biol, 41, 33-9.
  • Griffin, P.M.; Ostroff, S.M.; Tauxe, R.V.; Greene, K.D.; Wells, J.G.; Lewis, J.H.; Blake, P.A. (1988). Illnesses associated with Escherichia coli O157:H7 infections. Ann Intern Med, 109, 705-12.
  • Guddat, L.W.; Vos, S.; Martin, J.L.; Keough, D.T.; de Jersey, J. (2002). Crystal structures of free, IMP-, and GMP-bound Escherichia coli hypoxanthine phosphoribosyltransferase. Protein Sci, 11, 1626-38.
  • Hamzah, J.; Skinner-Adams, T.S.; Davis, T.M. (2003). In vitro antimalarial activity of retinoids and the influence of selective retinoic acid receptor antagonists. Acta Trop, 87, 345-53.
  • Hanes, C.S. (1932). Studies on plant amylases: The effect of starch concentration upon the velocity of hydrolysis by the amylase of germinated barley. Biochem J, 26, 1406-21.
  • Hänscheid, T. (1999). Diagnosis of malaria: a review of alternatives to conventional microscopy. Clin Lab Haematol, 21, 235-45.
  • Holden, J.A.; Kelley, W.N. (1978). Human hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase. Evidence for tetrameric structure. J Biol Chem, 253, 4459-63.
  • Ibrahim, S.F.; van den Engh, (2007). Flow cytometry and cell sorting. Advances in biochemical engineering/biotechnology, 106, 19-39.
  • Jones, T.A.; Zou, J.Y.; Cowan, S.W.; Kjeldgaard, M. (1991). Improved methods for building protein models in electron density maps and the location of errors in these models. Acta Crystallogr. A47, 110–119.
  • Keough, D.T.; McConachie, L.A.; Gordon, R.B.; de Jersey, J.; Emmerson, B.T. (1987). Human hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase. Development of a spectrophotometric assay and its use in detection and characterization of mutant forms. Clin Chim Acta, 163, 301-8.
  • Keough, D.T.; Ng, A.L.; Winzor, D.J.; Emmerson, B.T.; de Jersey, J. (1999). Purification and characterization of Plasmodium falciparum hypoxanthine-guanine-xanthine phosphoribosyltransferase and comparison with the human enzyme. Mol Biochem Parasitol, 98, 29-41.
  • Keough, D.T.; Skinner-Adams, T.; Jones, M.K.; Ng, A.L.; Brereton, I.M.; Guddat, L.W.; de Jersey, J. (2006). Lead compounds for antimalarial chemotherapy: purine base analogs discriminate between human and P. falciparum 6-oxopurine phosphoribosyltransferases. J Med Chem, 49, 7479-86.
  • Keough, D.T.; Hocková, D.; Holý, A.; Naesens, L.M.; Skinner-Adams, T.S.; Jersey, J.; Guddat, L.W. (2009). Inhibition of hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase by acyclic nucleoside phosphonates: a new class of antimalarial therapeutics. J Med Chem, 52, 4391-9.
  • Keough, D.T.; Hocková, D.; Krecmerová, M.; Cesnek, M.; Holý, A.; Naesens, L.; Brereton, I.M.; Winzor, D.J.; de Jersey, J.; Guddat, L.W. (2010). Plasmodium vivax hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase: a target for anti-malarial chemotherapy. Mol Biochem Parasitol, 173, 165-9.
  • Laboratory Identification of Parasites of Public Health concern, Diagnostic procedures, Blood specimen bench aids, Staining for malaria parasites. (2009). Retrieved September 6, 2010, from www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/PDF_Files/malaria_staining_benchaid.pdf 2009
  • Lesch, M.; Nyhan, W.L. (1964). A familial disorder of uric acid metabolism and central nervous system function. Am J Med, 36, 561-70.
  • Li, C.M.; Tyler, P.C.; Furneaux, R.H.; Kicska, G.; Xu, Y.; Grubmeyer, C.; Girvin, M.E.; Schramm, V.L. (1999). Transition-state analogs as inhibitors of human and malarial hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferases. Nat Struct Biol, 6, 582-7.
  • Lindsay, S.W.; Martens, W.J. (1998). Malaria in the African highlands: past, present and future. Bull World Health Organ, 76, 33-45.
  • López, J.M. (2008). Is ZMP the toxic metabolite in Lesch-Nyhan disease? Med Hypotheses, 71, 657-63.
  • Madrid, D.C.; Ting, L.M.; Waller, K.L.; Schramm, V.L.; Kim, K. (2008). Plasmodium falciparum purine nucleoside phosphorylase is critical for viability of malaria parasites. J Biol Chem, 283, 35899-907.
  • Mahony, W.B.; Domin, B.A.; McConnell, R.T.; Zimmerman, T.P. (1988). Acyclovir transport into human erythrocytes. J Biol Chem, 263, 9285-91.
  • Mendis, K.; Sina, B.J.; Marchesini, P.; Carter, R. (2001). The neglected burden of Plasmodium vivax malaria. Am J Trop Med Hyg, 64, 97-106.
  • Mendz, G.L.; Shepley, A.J.; Hazell, S.L.; Smith, M.A. (1997). Purine metabolism and the microaerophily of Helicobacter pylori. Arch Microbiol, 168, 448-56.
  • Musick, W.D. (1981). Structural features of the phosphoribosyltransferases and their relationship to the human deficiency disorders of purine and pyrimidine metabolism. CRC Crit Rev Biochem, 11, 1-34.
  • National Institute Of Allergy And Infectious Diseases (2001). Gene Sequence Of Deadly E. coli Reveals Surprisingly Dynamic Genome. ScienceDaily. Retrieved June 19, 2010, from http://www.sciencedaily.com­ /releases/2001/01/010125082330.htm
  • Neuhard, J. and Nygaard, P. (1987). Purines and pyrimidines. In Escherichia coli and Salmonella typhimurium: Cellular and molecular biology, vol 1 (eds. F.C. Neihardt, J.L. Ingraham, K. Brooks Low, B. Magasanik, M. Schaechter, and H.E. Umbarger), pp. 445–473. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
  • Parker, M.D.; Hyde, R.J.; Yao, S.Y.; McRobert, L.; Cass, C.E.; Young, J.D.; McConkey, G.A.; Baldwin, S.A. (2000). Identification of a nucleoside/nucleobase transporter from Plasmodium falciparum, a novel target for anti-malarial chemotherapy. Biochem J, 349, 67-75.
  • Paterson, D.L.; Bonomo, R.A. (2005). Extended-spectrum beta-lactamases. Clin Microbiol Rev, 18, 657-86.
  • Scapin, G.; Grubmeyer, C.; Sacchettini, J.C. (1994). Crystal structure of orotate phosphoribosyltransferase. Biochemistry, 33, 1287-94.
  • Seegmiller, J.E.; Rosenbloom, F.M.; Kelley, W.N. (1967). Enzyme defect associated with a sex-linked human neurological disorder and excessive purine synthesis. Science, 155, 1682-4.
  • Shi, W.; Li, C.M.; Tyler, P.C.; Furneaux, R.H.; Grubmeyer, C.; Schramm, V.L.; Almo, S.C. (1999). The 2.0 Å structure of human hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase in complex with a transition-state analog inhibitor. Nat Struct Biol, 6, 588-93.
  • Sony Insider, Sony Acquires iCyt And Officially Enters Flow Cytometry Business. Retrieved October 11, 2010, from http://www.sonyinsider.com/2010/02/12/sony-acquires-icyt-and-officially…
  • Tabor, S.; Richardson, C.C. (1985). A bacteriophage T7 RNA polymerase/promoter system for controlled exclusive expression of specific genes. Proc Natl Acad Sci USA, 82, 1074-8.
  • Ting, L.M.; Shi, W.; Lewandowicz, A.; Singh, V.; Mwakingwe, A.; Birck, M.R.; Ringia, E.A.; Bench, G.; Madrid, D.C.; Tyler, P.C.; Evans, G.B.; Furneaux, R.H.; Schramm, V.L.; Kim, K. (2005). Targeting a novel Plasmodium falciparum purine recycling pathway with specific immucillins. J Biol Chem, 280, 9547-54.
  • Trager, W.; Jensen, J.B. (1976). Human malaria parasites in continuous culture. Science, 193, 673-5.
  • Ullman, B.; Carter, D. (1997). Molecular and biochemical studies on the hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferases of the pathogenic haemoflagellates. Int J Parasitol, 27, 203-13.
  • Vos, S.; de Jersey, J.; Martin, J.L. (1996). Crystallization and preliminary X-ray crystallographic studies of Escherichia coli xanthine phosphoribosyltransferase. J Struct Biol, 116, 330-4.
  • Vos, S.; de Jersey, J.; Martin, J.L. (1997). Crystal structure of Escherichia coli xanthine phosphoribosyltransferase. Biochemistry, 36, 4125-34.
  • Vos, S.; Parry, R.J.; Burns, M.R.; de Jersey, J.; Martin, J.L. (1998). Structures of free and complexed forms of Escherichia coli xanthine-guanine phosphoribosyltransferase. J Mol Biol, 282, 875-89.
  • Walsh, C.J.; Sherman, I.W. (1968). Purine and pyrimidine synthesis by the avian malaria parasite, Plasmodium lophurae. J Protozool, 15, 763-70.
  • Wang, J.; Su, C.; Neuhard, J.; Eriksson, S. (2000). Expression of human mitochondrial thymidine kinase in Escherichia coli: correlation between the enzymatic activity of pyrimidine nucleoside analogues and their inhibitory effect on bacterial growth. Biochem Pharmacol, 59, 1583-8.
  • Wong, C.S.; Jelacic, S.; Habeeb, R.L.; Watkins, S.L.; Tarr, P.I. (2000). The risk of the hemolytic-uremic syndrome after antibiotic treatment of Escherichia coli O157:H7 infections. N Engl J Med, 342, 1930-6.
  • Xicohtencatl-Cortes, J.; Monteiro-Neto, V.; Saldaña, Z.; Ledesma, M.A.; Puente, J.L.; Girón, J.A. (2009). The type 4 pili of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 are multipurpose structures with pathogenic attributes. J Bacteriol, 191, 411-21.
  • Zabzdyr, J.L.; Lillard, S.J. (2001). UV- and visible-excited fluorescence of nucleic acids separated by capillary electrophoresis. J Chromatogr A, 911, 269-76.
  • Zipper, H.; Brunner, H.; Bernhagen, J.; Vitzthum, F. (2004). Investigations on DNA intercalation and surface binding by SYBR Green I, its structure determination and methodological implications. Nucleic Acids Res, 32, 103.
Download scriptie
Universiteit of Hogeschool
KU Leuven
Master in de Geneesmiddelenontwikkeling
Publicatiejaar
2011
Share this on: